PCR പരീക്ഷണങ്ങളിൽ സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന നിരവധി എൻസൈമുകൾ

പോളിമറേസ് ചെയിൻ പ്രതികരണം, എന്ന് ചുരുക്കിപിസിആർഇംഗ്ലീഷിൽ, പ്രത്യേക ഡിഎൻഎ ശകലങ്ങൾ വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ ഉപയോഗിക്കുന്ന ഒരു മോളിക്യുലാർ ബയോളജി ടെക്നിക്കാണ്.ശരീരത്തിന് പുറത്തുള്ള ഒരു പ്രത്യേക ഡിഎൻഎ പകർപ്പായി ഇതിനെ കണക്കാക്കാം, ഇത് ഡിഎൻഎയുടെ വളരെ ചെറിയ അളവിൽ വർദ്ധിപ്പിക്കും.മുഴുവൻ സമയത്തുംപിസിആർപ്രതികരണ പ്രക്രിയയിൽ, ഒരു തരം പദാർത്ഥങ്ങൾ ഒരു പ്രധാന പങ്ക് വഹിക്കുന്നു - എൻസൈമുകൾ.

1. ടാക്ക് ഡിഎൻഎ

യുടെ ആദ്യ നാളുകളിലെ പരീക്ഷണങ്ങളിൽപിസിആർ, ശാസ്ത്രജ്ഞർ Escherichia coli DNA polymerase I ഉപയോഗിച്ചു, എന്നാൽ ഈ എൻസൈമിൽ ഒരു പ്രശ്നമുണ്ട്: ഓരോ സൈക്കിൾ നടത്തുമ്പോഴും ഇതിന് പുതിയ എൻസൈം നിറയ്ക്കേണ്ടതുണ്ട്, ഇത് പ്രവർത്തന ഘട്ടങ്ങളെ അൽപ്പം സങ്കീർണ്ണമാക്കുന്നു, ഇത് പൂർണ്ണമായും യാന്ത്രികമായി വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ പ്രയാസമാണ്.1988-ൽ തെർമസ് അക്വാട്ടിക്കസിൽ നിന്ന് ശാസ്ത്രജ്ഞർ ആകസ്മികമായി Taq DNA പോളിമറേസ് വേർതിരിച്ചെടുത്തതിന് ശേഷമാണ് ഈ പ്രശ്നം പരിഹരിച്ചത്. അതിനുശേഷം ഡിഎൻഎയുടെ ഓട്ടോമാറ്റിക് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഒരു യാഥാർത്ഥ്യമായി.ഈ എൻസൈമിന്റെ കണ്ടെത്തലും ഉണ്ടാക്കുന്നുപിസിആർസാങ്കേതികവിദ്യ സൗകര്യപ്രദവും പ്രായോഗികവും സാർവത്രികവുമായ സാങ്കേതികവിദ്യയാണ്.നിലവിൽ, ഡിഎൻഎ കിറ്റുകളിലെ ഏറ്റവും സാധാരണമായ പോളിമറേസാണ് ടാക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്.

2. PfuDNA

മുകളിൽ സൂചിപ്പിച്ചതുപോലെ, Taq DNase-ന് ഒരു വലിയ ബഗ് ഉണ്ട്, അതിനാൽ പൊരുത്തക്കേട് കാരണം നിർദ്ദിഷ്ടമല്ലാത്ത ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഒഴിവാക്കാൻ ശാസ്ത്രജ്ഞർ Taq DNA പോളിമറേസ് ഒരു പരിധിവരെ പരിഷ്‌ക്കരിച്ചു, അതിന്റെ ഫലമായി തെറ്റായ പരിശോധനാ ഫലങ്ങൾ.എന്നാൽ ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസിന്റെ പരിഷ്ക്കരണത്തിന് ഊഷ്മാവിൽ ഡിഎൻഎ പോളിമറേസിന്റെ പ്രവർത്തനത്തെ തടയാൻ കഴിയും.ടാക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസിന്റെ മേൽപ്പറഞ്ഞ പോരായ്മകൾ PfuDNA പോളിമറേസിന് നന്നായി നികത്താൻ കഴിയും, അതുവഴി PCR പ്രതികരണം സാധാരണഗതിയിൽ നടത്താനും ടാർഗെറ്റ് ജീൻ ആംപ്ലിഫിക്കേഷന്റെ വിജയ നിരക്ക് ഫലപ്രദമായി മെച്ചപ്പെടുത്താനും കഴിയും.

3. റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ്

റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ് 1970-ൽ കണ്ടുപിടിച്ചു. ഈ എൻസൈം ആർഎൻഎയെ ഒരു ടെംപ്ലേറ്റായും ഡിഎൻടിപിയെ ഒരു സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റായും ഉപയോഗിക്കുന്നു, അടിസ്ഥാന ജോടിയാക്കൽ തത്വം പിന്തുടരുന്നു, കൂടാതെ 5′-3′ ദിശയിൽ ആർഎൻഎ ടെംപ്ലേറ്റിന് പൂരകമായ ഒരു ഡിഎൻഎ സിംഗിൾ സ്ട്രാൻഡ് സമന്വയിപ്പിക്കുന്നു.റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ് പ്രാഥമികമായി ഡിഎൻഎ അല്ലെങ്കിൽ ആർഎൻഎ ടെംപ്ലേറ്റുകളിൽ നിന്നുള്ള ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് പ്രവർത്തനത്തെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു, അതിനാൽ 3′-5′ എക്സോന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനമില്ല.എന്നിരുന്നാലും, ഇതിന് RNase H പ്രവർത്തനമുണ്ട്, ഇത് റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസിന്റെ സിന്തസിസ് ദൈർഘ്യത്തെ ഒരു പരിധിവരെ പരിമിതപ്പെടുത്തുന്നു.വൈൽഡ് റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസിന്റെ കുറഞ്ഞ വിശ്വാസ്യതയും തെർമോസ്റ്റബിലിറ്റിയും കാരണം, ശാസ്ത്രജ്ഞരും ഇത് പരിഷ്കരിച്ചു.

വേണ്ടിപിസിആർപരീക്ഷണങ്ങൾ, പ്രധാന ഉപഭോഗവസ്തുക്കൾ ഇവയാണ്: വ്യക്തിഗത PCR ട്യൂബ്, 4/8-സ്ട്രിപ്പ് PCR ട്യൂബ്, PCR പ്ലേറ്റുകൾ.

ലാബിയോയുടെPCR ഉപഭോഗവസ്തുക്കൾഇനിപ്പറയുന്നവ ഉണ്ടായിരിക്കുകനേട്ടങ്ങൾ:

പിസിആർ പ്ലേറ്റുകൾ: വിശാലമായ തെർമൽ സൈക്ലർ അനുയോജ്യത;ഉയർന്ന ദൃശ്യതീവ്രത, എളുപ്പത്തിൽ തിരിച്ചറിയൽ;നന്നായി ഫ്ലൂറസെൻസ് പ്രതിഫലനം;നല്ലത്താപ കൈമാറ്റം;സാക്ഷ്യപ്പെടുത്തിയ DNase, RNase, DNA, PCR ഇൻഹിബിറ്ററുകൾ, കൂടാതെ പരീക്ഷിച്ച പൈറോജൻ രഹിതം.

വ്യക്തിഗത പിസിആർ ട്യൂബുകൾ: ബാഷ്പീകരണം-പ്രതിരോധം;നല്ലത്താപ കൈമാറ്റം;മികച്ച ഒപ്റ്റിക്കൽ വ്യക്തത; സാക്ഷ്യപ്പെടുത്തിയ DNase, RNase, DNA, PCR ഇൻഹിബിറ്ററുകൾ, കൂടാതെ പരീക്ഷിച്ച പൈറോജൻ രഹിതം.

4/8-സ്ട്രിപ്പുകൾ പിസിആർ ട്യൂബുകൾ: അൾട്രാ-നേർത്ത മതിലുകൾ, ഉയർന്ന വ്യക്തത, നല്ല ഫ്ലൂറസെൻസ് പ്രതിഫലനം;ഫാർമസ്യൂട്ടിക്കൽ വ്യവസായം, ഭക്ഷ്യ വ്യവസായം, മോളിക്യുലർ ബയോളജി എന്നിവയിൽ ഉപയോഗിക്കാൻ കഴിയും;ഉയർന്ന നിലവാരമുള്ള, വിർജിൻ പിപി മെറ്റീരിയൽ;സർട്ടിഫൈഡ് DNase, RNase, DNA, PCR ഇൻഹിബിറ്ററുകൾ, കൂടാതെ പരീക്ഷിച്ച പൈറോജൻ-ഫ്രീ.